cck8吸光度测试_吸光度测试原理

细胞活性和细胞毒性检测的实验方法？

细胞数量确定

cck8吸光度测试_吸光度测试原理

1.将细胞悬浮液（100μL/孔）接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。

2.向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。

3.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。

4.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

细胞增殖和细胞毒性测定

1.将种子细胞以103-104个细胞/孔的密度在96孔板中在100μL培养基中培养。将细胞在CO2培养箱中于37℃培养24小时。

2.将不同浓度的待测物质加入板中。

3.将培养板在培养箱中孵育适当的时间（例如，6,12,24或48小时）。

4.使用重复移液器向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。

5.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。

6.在读取孔板之前，重要的是在轨道振动器上轻轻混合1分钟，以确保颜色均匀分布。

7.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

数据分析

统计分析有几种方法，您可以选择使用O.D.值或细胞数量，我们提供其中一种方法。

细胞（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100

抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100

As =实验孔吸光度（含有细胞，培养基，CCK-8和待测化合物的孔的吸光度）。

Ab =空白孔吸光度（含有培养基和CCK-8的孔的吸光度）。

Ac =对照孔吸光度（含有细胞，培养基和CCK-8的孔的吸光度）。

制作标准曲线

1. 细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数。

2. 使用培养基，等比稀释细胞悬液为一个浓度梯度，通常需要5-7个浓度梯度，每组几个复孔。然后接种细胞。（注意每孔的细胞数量。如果您将细胞悬液稀释在管中，在加入培养板的孔之前，请小心再次混匀细胞。每孔中细胞悬液的体积应该是一致的。）

3. 培养直至细胞贴壁（通常2-4小时），然后每100 μl培养基加入10 μl CCK-8。继续孵育1-4小时，用酶标仪测量450nm处的吸光度。制作出一条以细胞数为X轴坐标，O.D.值为Y轴坐标的标准曲线。

可以基于该曲线确定待测样品的细胞数。使用此标准曲线的先决条件是培养检测条件相同。

注意事项

1. 确保物和CCK8均匀分布在培养基中。

2. 细胞增殖越多, 颜色越深; 细胞毒性越强，颜色越浅。

3. 对于贴壁细胞，每孔至少需要1000个细胞（100 μl培养基）。对于白细胞，由于灵敏度较低，每孔至少需要0个细胞（100 μl培养基）。的96孔板每孔细胞数为00。如果使用24孔或6孔板进行该检测，请计算相应的每孔的细胞数，并调整CCK-8的体积，使其为每孔总液体体积的10％。

4. 因为CCK8测定是基于活细胞中的脱氢酶活性，影响脱氢酶活性的条件或化学物质可能导致实际活细胞数与使用CCK-8测定活细胞数之间有异。

5. WST-8可能与还原剂反应生成WST-8 formazan。如果使用还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测。如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。

6. 孵育2小时后，背景O.D.值一般为0.1-0.2单位。

7. 注意不要在孔中引入气泡，因为它们会干扰O.D.值。

8. 如果您想对CCK8溶液进行灭菌，请使用0.2 μm的膜过滤溶液。

9. 孵育时间因孔中细胞的类型和数量而异。通常，白细胞着色较弱，因此可能需要较长的孵育时间（长达4小时）或大量细胞（~105细胞/孔）。

10. 如果细胞悬液中存在高浊度, 测量并减去样品在600nm或更高波长的O.D值。

11. CCK8不能用于细胞染色。

12. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

13. CCK8的毒性非常低，在CCK8测定完成后，相同的细胞可用于其他细胞增殖测定，例如结晶紫测定，中性红测定或DNA荧光测定。（除非细胞极为稀少，不。）

14. 该试剂盒可用于大肠杆菌，但不能用于酵母细胞。

15. 在读取平板之前，您可以在摇床上轻柔混匀。

16. 我们建议将细胞接种在靠近培养板的孔中，最外围一圈孔中的培养基容易蒸发，可以用PBS，水或培养基填充这些孔。

17. 如果您没有450nm滤光片。您也可以使用吸光度在430和490nm之间的滤光片, 450nm滤光片具有灵敏度。

18. 测量450nm处的吸光度，如果您需要进行双波长测定，作为参考波长可以测定650nm处的吸光度。

19. 物中金属离子的存在可能会影响CCK8的灵敏度。终浓度为1mM的氯化亚铅、、硫酸铜会抑制 5%、15%、 90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会抑制。

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测试剂 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

cck8加少了

你是问cck8加少了会有什么影响吗？

首先要确认物是否有吸收，在含有物的培养基中加入CCK8，测定450 nm 的吸光度，如果它的吸光度比不含物的培养基 (加CCK8)的吸光度高，则证明物有影响，可在加CCK8之前更换培养基，去掉物的影响。

如果物具有还原性，会和CCK8发生显色反应，增加吸光度。

cck8的a值和od值的数值相同吗

CCK8作说明

细胞活性检测

1. 在96 孔板中接种细胞悬液 (100 ml /孔 ) 。将培养板放在培养箱预培养 (在37 ℃，5% CO2的条件下 )。

2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

4. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

5. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

细胞增殖 -毒性检测

1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。

2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。

3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。

4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。

5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。

6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24小时内吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉物的影响。当然物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入物后的空白吸收即可。

制作标准曲线

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK-8后的培养时间)。

同仁CCK8检测步骤

CCK-8 检测步骤

1. 向各孔中加入100 μl细胞悬液。a)

2. 在37℃下预孵育培养板。b)

3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液c)10 μl。

4. 37℃下孵育。

5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

6. 37℃下孵育1-4小时。e)

7. 测定450 nm处的OD值。

a) 使用适当的培养基制备50,000-100,000个/ml的细胞悬液。

b) 建议使用CO2培养箱过夜预培养。

c) 使用培养基或PBS来制备溶液。

d) 如果待测溶液有还原性，测定不含细胞，但含有CCK-8的待测溶液在450 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl CCK-8进行检测。

e) 白细胞可能需要培养较长时间。

活力计算

细胞活力（％）=[A(加)-A（空白）]/[A（0加）-A（空白）] ×100

A（加）：具有细胞、CCK-8溶液和物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0加）：具有细胞、CCK-8溶液而没有物溶液的孔的吸光度

细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

DOJINDO CCK8 初学者问答 (同仁DOJINDO)

CCK8为什么不能见光

因为CCK8实验中吸光度值太高，不利于实验作。

拿出96孔板走去上机测前要包裹锡纸避光。

CCK-8是一种基于WST-8的检测细胞增殖和细胞毒性的方法。

吸光度的空白对照组怎么设置

吸光度的空白对照组设置在不含细胞的培养基中加入CCK8。根据查询相关公开资料得知在不含细胞的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加实验(细胞毒性实验)时，还应考虑物的吸收，可在不含细胞，加入物的培养基中加定的时间，测定450nm的吸光度作为空白对照。

我想测吸光度用酶标仪，用多孔细胞培养板行吗？请问酶标板多孔细胞培养板有什么区别？

可以，测定时你把空白的孔设定为blank，测出值减去空白值就可以了，但你要查一下，国内外发表的关于你的研究内容的文章，他们认不认直接由酶标仪读出的数，如果认的话，你要在相同的条件下做一个标准曲线换算一下。

如果普通单测某个液体吸光度（如蛋白质浓度标定），用哪个板没区别，只要是平底就行（不要U形底）。

如果涉及到ELISA，需要做包被（coat），则酶标板表面经特别处理，能较好吸附抗原/抗体，而细胞培养板较。

cck8od值为什么1

cck8od值为什么1的原因是OD值越大说明微生物越多，一般2左右。

针对不同菌种的培养基，需要自己前期做一个标准曲线。也就是用培养基为空白对照，不同生长阶段发酵液为样品测定OD值，并测定这些阶段的活菌数，此后再按照发酵时间对比标准曲线得出单位活菌数。但是活菌的生长不完全稳定性和细菌的自然沉降都会影响实验结果，如果看趋势可以使用，如果要获得详细数据没办法还得活菌计数。光通过被检测物，前后的能量异即被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

《科技编辑大辞典》对光密度的定义是：入射光强度与透射光强度之比值的常用对数值。专业书籍则这样解释“吸光度”：入射光和透射光的透过率之比值的常用对数值，也称光密度。分析可见，两个概念其实是一致的，“光密度”就是“吸光度”，且用“光密度”符合标准，更规范。