关于taqman，taqman探针这个很多人还不知道，今天小爱来为大家解答以上的问题，现在让我们一起来看看吧！
taqman(taqman探针)
taqman(taqman探针)
1、荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高。
2、目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针(荧光共振能量传递探针)和分子信标Molecular Beacon。
3、广泛使用的TaqMan探针法是指PCR扩增时在加入一对引物 的同时另外加入一个特异性的荧光探针，该探针只与模板特异性地结合，其结合位点在两条引物之间。
4、探针的5′端标记有荧光报告基团(Reporter, R)，如FAM、VIC等，3′端标记有荧光淬灭基团(Quencher, Q)，如RA等。
5、当探针完整的时候，5′端报告基团经仪器光源激发的荧光正好被近距离的3′端荧光基团淬灭，仪器检测不到5′端报告基团所激发的荧光信号(就是说5’荧光基团的发射波长正好是3’ 荧光基团的吸收波长，因而能量被吸收传递到3’荧光基团而发出其它荧光)。
6、随着PCR的进行，Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其5′-3′外切酶活性(此活性是双链特异性的，游离的单链探针不受影响)就会将切割探针，释放5′端报告基团游离于反应体系中，远离3′端荧光淬灭基团的屏蔽，5′端报告基团受激发所发射的荧光信号就可以被探头检测到。
7、也就是说每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
8、报告信号的强度就代表了模板DNA的拷贝数。
9、(请注意，该图显示的不是普通的Taqman探针法，而是Taqman MGB探针法)Taqman探针检测的是积累荧光。
10、常用的荧光基团有FAM，TET，VIC，HEX等等。
11、当探针完整的时候，由于3′端的荧光淬灭基团在吸收5′端报告基团所发射的荧光能量，本身会发射波长不同的荧光而导致本底高，因此TaqMan探针近来又有新的发展——TaqMan MGB探针。
12、MGB探针的淬灭基团采用非荧光淬灭基团(Non-Fluorescent Quencher)，本身不产生荧光，可以大大降低本底信号的强度。
13、同时探针上还连接有MGB (Minor Groove Binder)修饰基团，可以将探针的Tm值提高10°C左右。
14、因此为了获得同样的Tm值，MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短，既降低了合成成本，也使得探针设计的大为提高——因为在模板的DNA碱基组成不理想的情况下，短的探针比长的更容易设计。
15、实验证明，TaqMan MGB探针对于富含A/T的模板可以区分得更为理想。
16、Taqman探针法已经得到广泛使用，不过有人认为这种技术利用了Taq酶5 —3 外切酶活性，一般 试剂 厂家只给Taq酶的聚合酶活性定标，没有同时给Taq酶5 —3 外切酶活性定标，不同批号试剂之间会给定量带来异。
17、另外对探针的熔点温度(Tm)仅要求其高于60°C，这就使不同 试剂盒 之间的特异性参不齐，难于做质控检测。
18、Real time PCR Taqman探针设计、实时多重PCR探针的选择和引物的设计及评价一、实时荧光Taqman 探针设计总原则：探针选择要保守，引物选择要保守，因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。
本文到这结束，希望上面文章对大家有所帮助。